本项研究从分子生物学水平，揭示脾虚时出现多系统损伤的病态膜学基础，探讨脾虚动物模型的生物膜结构与功能变化的规律，为脾的本质提供现代科学依据。
一、脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型的制备
1．造模因素和方法：根据中医病因发病学原理，采用包含饮食不节、劳力过度和药物苦寒伤阳、辛热伤阴等复合因素塑造脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型。
2．模型的诊断标准：根据
①中西医结合研究会虚证与老年病专业委员会制定的“中医虚证辨证参考标准”（1986年修订）；
②中华人民共和国卫生部药政司制定的“中药治疗脾虚证的临床指导原则”；
③大白鼠的生物学特性，制定出类脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型的诊断标准。
3．动物模型的建立：按积分法计算脾虚各证模型的症状和体征的积分值，并引入动物模型的体重、体温和运动前后血乳酸值等定量指标作为评估模型建立和辅助条件。体温、体重和血乳酸值的变化，实验组与对照组，以及实验组组间均有非常显著性差异（P＜001），由此可以确定脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型的建立。
二、观察指标
1．脂质过氧化物和抗氧化酶：
①脂质过氧化物（LPO）的测定：共轭双烯（CD）据Pryor WAand Castlel法，丙二醛（MDA）用Ohkawa法。
②抗氧化酶的测定：铜锌超氧化物歧化酶（Cu Zn－SOD）用Marklund法，硒谷胱甘肽过氧化物酶（Se－GSH－Px）用Hafeman法，过氧化氢酶（CAT）用Johansoon法。
2．线粒体超微结构的观察：取心肌、骨骼肌（比目鱼肌）、肝和小肠上段制成标本，用HEM－1200X电镜观察线粒体的变化。其中，心肌和骨骼肌则应用Unverferth计量法进行观察。
三、实验结果
1．脾虚证与脂质过氧化损伤
本研究发现脾虚证实验动物模型血清脂质过氧化产物CD和MDA含量均明显升高，而机体抗氧化防御系统中的抗氧化酶类Cu Zn－SOD、Se－GSH－Px和CAT活性均明显降低，反映机体抗氧化能力的重要参数Se－GSH－Px／LPO（MDA）比值亦明显下降，说明在脾虚病理状态下，膜系统受到了过氧化损伤，机体对脂质过氧化应激反应能力降低，抗氧化能力显著下降。线粒体是三羧酸循环和氧化磷酸化的主要场所，是生物体内从食物获取能量的主要装置，有细胞动力站之称。脂质过氧作用易于损伤线粒体，出现结构和功能的异常，脾虚证实验动物心肌、骨骼肌、肝和小肠的线粒体数目减少，肿胀，嵴减少甚或消失，膜破损，基质变性或溢出，导致三羧酸循环、电子传递链和氧化磷酸化不能正确进行，影响了机体的物质代谢和能量代谢。脾虚证动物模型血清脂质过氧化物含量升高，抗氧化酶活性降低，机体抗氧化能力下降和线粒体超微结构的改变，从宏观与微观，从结构与功能改变的高度一致性，证实了脾虚证与生物膜结构和功能的损伤密切相关，中医学“脾为气血生化之源，后天之本”的理论似与生物膜结构和功能的正常有密切关系。
2．脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证与脂质过氧化损伤
中医学认为，脾虚证有气虚、阳虚和阴虚之分，三者在病机上既有联系又有区别，其临床表现和治疗方法也不尽一致。本研究结果表明，脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型的LPO、抗氧化酶和机体抗氧化能力参数等指标，组间均有明显差别，其线粒体超微结构和变化也有所不同。其中，MDA、Se－GSH－Px和Se－GSH－Px／MDA比值，组间差异非常显著。CD、Cu Zn－SOD和CAT三项指标，除脾气虚组与脾阳虚组CD和Cu Zn－SOD组间差异不显著外，余者均有显著或非常显著差异。对脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型的LPO、抗氧化酶等进行了多元判别分析，对判别函数的有效检验均P＜001。上述结果不仅提示脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证具有不同的病理变化，而且也证明了各证候的独立存在具有生物膜不同改变的物质基础。
中医学认为，气虚为阳虚之渐，阳虚为气虚之极，故脾阳虚证较脾气虚证为重。阳以阴为基，阴以阳为统，然阳为生之本，故“阴阳并需，而养阳在滋阴之上”（《医宗必读》），可见脾阳虚证似较脾阴虚证为甚。本研究发现实验动物模型MDA升高和Se－GSH－Px下降的程度，依次为脾阳虚证、脾阴虚证、脾气虚证，而Se－GSH－Px／MDA比值，则依次为脾气虚证、脾阴虚证、脾阳虚证。据此可知，脂质过氧化损伤的程度，以脾阳虚证为重，脾阴虚证居次，脾气虚证为轻。而机体潜在的抗氧化能力，则以脾气虚证为强，脾阴虚证居次，脾阳虚证为弱。至于CD升高虽脾气虚证甚于脾阳虚证，但组间无显著性差异。Cu Zn－SOD和CAT下降则脾阳虚证甚于脾气虚证（Cu Zn－SODP＜005），提示脾阳虚证较脾气虚证为重。CD升高则脾阳虚证甚于脾阴虚证，而Cu Zn－SOD和CAT下降则脾阴虚证甚于脾阳虚证（CATP＞005）。就CD、Cu Zn－SOD和CAT变化难以判定脾阳虚证与脾阴虚证之孰轻孰重，尚需进一步研究。但我们综合分析各项指标，特别是MDA、Se－GSH－Px和Se－GSH－Px／MDA，与脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型之间的关系，表明其病势由重而轻的次序是脾阳虚证、脾阴虚证、脾气虚证，提示脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物的膜系统损伤及其程度是不同的。
3．健脾益气药、温补脾阳药和滋阴健脾药的抗氧化作用：本研究发现脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证的反证组的CD和MDA含量均显著下降，与相应的实验组有非常显著差异（P＜001）。其Se－GSH－Px、Cu Zn－SOD和CAT活性明显增强，除脾气虚反证组与相应实验组的Se－GSH－Px和CAT差别不显著（P＞005）外，皆差别非常显著（P＜001）。并且反证组的LPO、抗氧化酶和线粒体超微结构，几乎达到了正常对照组的水平。表明健脾益气药、温补脾阳药和滋阴健脾药，对清除自由基，增强抗氧化酶活性和提高机体抗氧化能力具有显著作用。
Se－GSH－Px／MDA比值，脾阴虚反证组最高，脾阳虚反证组次之，且明显等于对照组，而脾气虚证亦接近对照组水平。说明提高机体抗氧化能力，以滋阴健脾药为最高，温补脾阳药居中，健脾益气药为逊，其作用机制有待进一步研究。
本研究发现脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证动物模型血清LPO升高，抗氧化酶活性下降，机体抗氧化能力显著降低，心肌、骨骼肌、肝和小肠线粒体超微结构异常，且有轻重之别，说明脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证与生物膜的损伤及其损伤程度有密切关系，为脾的生理病理和脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证的本质，提供了分子生物学基础。健脾益气药、温补脾阳药和滋阴健脾药具有提高机体抗氧化能力的作用，以滋阴健脾药最为显著，对探讨自由基医学与证的关系和疾病的治疗，以及衰老学说等方面研究，均具有重要的学术意义和实用价值。
